[其他]以親和力層析法純化血紅素及改良血紅素

在審

• 申請號: 86104458
• 申請日: 1986-06-26
• 公開（公告）號: CN86104458A
• 公開（公告）日: 1987-07-01
• 發明（設計）人: 夏仁長
• 申請（專利權）人: 希莫索爾公司
• 主分類號: A61K35/18
• 分類號: A61K35/18;G01N33/72;C07K3/20
• 代理公司: 中國專利代理有限公司
• 代理人: 王巍

本發明系關于血紅素基無細胞遞氧體（hemoglobin-based????acellular????oxygen????carriers），尤其系一種藉親和力層析法技術純化血紅素及改良的血紅素。

研究于發展無細胞遞氧溶液以應用為一血液取代注重兩方面，即血紅素基之溶液及過氟碳物質（perfluorocarbon????substances）如在必羅（Biro）之例子說明（Can.Med.Assoc.J，Vol.129，1983，Pp.237-244）。目前的工作已指示，過氟碳類為較不適合，原因是，例如，特別的臨床條件為其應用上之需要及毒性問題。因此，現在的研究系集焦于潛在血紅素基血液取代。因為血紅素于溶液（而非它在自然發現于紅血球中）在生理而言并非為滿意遞氧體，發展具有優良遞氧及循環特征之血紅素衍生物被委任。

于本研究中血紅素之主要來源是目前“落后”輸血者“紅血球在自然上含有豐富之血紅素。從這此來源血紅素之隔離藉數種方法而已達成，該等方法為牽涉從其他紅血球細胞蛋白質及從細胞基質（cell????stroma）之血紅素分離方法。

純化血紅素之標準技術為離子交換層析法（ion-exchange????chromatography）。此技術已經很廣泛的被用于分析（analytical）及診斷（diagnostic）應用（例如，參考Benesch????and????Benesch;Meth????Enzymol.，Vol.76，PP，174-179，1981;及Hsia????et????al，J.Chromatog.，Vol.303，PP.425-428，1984）。

然而，一種較迅速及特殊之純化技術為親和力層析法，它選擇上隔離生物分子，藉其對某種分子、原子團、離子、或基稱為配合基（ligands）而與生物分子形成復合物之束縛特殊性。一般上，在此技術中，配合基在一層析的凝膠上是制動的，而一含所需分子之溶液經由凝膠而傳送。所需之分子是保留在凝膠上，是憑藉其特殊束縛配合基，而同時其他存在于此溶液之成份被洗提。

已得曉，血紅素特別的束縛小多元陰離子性分子，尤其是2，3-二磷酸甘油酸鹽（2，3-diphosphoglycerate）（DPG）及三磷酸腺苷（adenosine????triphosphate）（ATP），自然的存在于哺乳類紅血球（Benesch????and????Benesch????Nature，Vol，221;P.618，1969）。血紅素之束縛處位置即束縛進行位置是位于或接近血紅素之四聚物結構之中心（Arkone，A.，Nature，Vol.237，P.146，1972）。這些多元陰離子性分子束縛血紅素于位置為重要的在于調整氧束縛親和力，因多元陰離子性分子之束縛異形位阻上影響了血紅素之組成進而引起這些和氧束縛親和力之減少（Benesch????and????Benesch，Biochem，Biophys.Res.Comm.，Vol.26，P.162，1967）相反的，氧束縛于血紅素異形位阻上減少了血紅素對多元陰離子之親和力。因此，氧血紅素（Oxyhemoglobin）很弱的束縛DPG及ATP。這在奧卡大（Ogata）及麥康尼爾（（Mcconnell）（Ann.N.Y.Acad.Sc.Vol.222，P.56，1973）描述之旋轉標記ATP（spin-labelled????ATP）束縛氧血紅素及無氧血紅素有表示。

較特定的，上述多元陰離子性分子之束縛處是一般上介于血紅素之B-血球蛋白（B-glebin）鏈之間，而可被認為是介于鏈之間的一“裂縫”。在紅血球之自然條件下，這裂縫是由-DPG（于其醛類形式）之分子所占據。當血紅素與氧束縛時以形成氧血紅素，一結構重組形成而產生DPG由裂縫冒出而它被認為裂縫關閉之有效性。氧的一分子束縛該四聚物的血紅素實際上增加其氧親和力，以束縛至一第二、第三及第四個氧分子。