[其他]直接將DNA插入質(zhì)體和線粒體

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 86107908
• 申請日: 1986-11-21
• 公開（公告）號: CN86107908A
• 公開（公告）日: 1987-09-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 英格·波特里庫斯;雷蒙德·道格拉斯·希利托;馬麗·戴爾·奇爾頓
• 申請（專利權(quán)）人: 希巴-蓋吉股份公司
• 主分類號: C12N15/00
• 分類號: C12N15/00;C12N5/00
• 代理公司: 中國國際貿(mào)易促進委員會專利代理部
• 代理人: 辛敏忠,顧柏棣

1、將含有一個或多個具有在質(zhì)體或線粒體中行使功能啟動子的基因的DNA直接引入到植物細胞原生質(zhì)體中的質(zhì)體或線粒體中的方法。

該方法包括將上述DNA暴露于懸浮在基質(zhì)中的原生質(zhì)體，在該基質(zhì)中DNA在足夠的時間內(nèi)滲入原生質(zhì)體和原生質(zhì)體中的質(zhì)體或線粒體，而不必將原生質(zhì)體暴露于病源菌。

2、根據(jù)權(quán)利要求1的方法，包括從轉(zhuǎn)化原生質(zhì)體再生植物細胞的步驟。

3、根據(jù)權(quán)利要求2的方法，進而包括從植物細胞再生整株植物。

4、根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中DNA是線性的。

5、根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中的DNA是一個質(zhì)粒。

6、根據(jù)權(quán)利要求5的方法，其中質(zhì)粒含或不含一個或多個T-DNA邊緣區(qū)。

7、根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中的DNA含有一個能給質(zhì)體和線粒體提供除草劑抗性的基因。

8、根據(jù)權(quán)利要求7的方法，其中的除草劑是阿特拉津。

9、根據(jù)權(quán)利要求7的方法，其中的DNA提供除草劑抗性和第二個農(nóng)學(xué)上有的性狀（特征）。

10、根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中的DNA包括一個可選擇的標記基因和一個提供農(nóng)學(xué)上有用性狀的基因。

11、根據(jù)權(quán)利要求10的方法，其中可選擇的標記基因提供抗生素抗性。

12、根據(jù)權(quán)利要求11的方法，其中的抗生素是氯霉素或卡那霉素。

13、根據(jù)權(quán)利要求10的方法，其中農(nóng)學(xué)上有用的性狀是抗除草劑。

14、根據(jù)權(quán)利要求13的方法，其中的除草劑是阿得拉津。

15、根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中的基因是嵌合體。

16、根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中的DNA包括一個復(fù)制信號。

17、根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中的DNA包括一個整合信號。

18、根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中的植物細胞原生質(zhì)體是一個葉細胞原生質(zhì)體。

19、根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中的基質(zhì)是一種滲透性穩(wěn)定的原生質(zhì)體培養(yǎng)基。

20、根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中的基質(zhì)包括植物耐受的二價陽離子。

21、根據(jù)權(quán)利要求20的方法，其中的二價陽離子是鎂離子或鈣離子。

22、根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中的基質(zhì)包括多元醇，這種多元醇能修飾原生質(zhì)體膜和促進細胞融合。

23、根據(jù)權(quán)利要求22的方法，其中的多元醇是聚乙二醇，聚丙烯乙二醇或聚乙烯醇。

24、根據(jù)權(quán)利要求23的方法，其中的多元醇是聚乙二醇。

25、根據(jù)權(quán)利要求24的要求方法，其中的聚乙二醇分子量為1000到10，000。

26、根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中的DNA和原生質(zhì)體接受熱振蕩。

27、根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中的DNA和原生質(zhì)體接受電擊。

28、根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中DNA引進原生質(zhì)體是通過至少結(jié)合下述方法的兩個完成的：聚乙二醇處理，熱振蕩和電擊。

29、根據(jù)權(quán)利要求28的方法，其中的基因轉(zhuǎn)移首先是通過將外源基因和原生質(zhì)體導(dǎo)入某一溶液，然后將懸液先接受熱振蕩，再用聚乙二醇處理完成的。

30、根據(jù)權(quán)利要求28的方法，其中的基因轉(zhuǎn)移是通過先將外源基因和原生質(zhì)體導(dǎo)入某一溶液，然后將懸液先接受熱振蕩，再用聚乙二醇處理，最后接受電擊。

31、根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中的基質(zhì)包括能用來修飾原生質(zhì)體膜而促進細胞融合的多元醇，DNA和原生質(zhì)體至少接受電擊或熱振蕩一種處理。

32、根據(jù)權(quán)利要求1的方法，進而包括使細胞外核酸酶失活的步驟。

33、根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中的原生質(zhì)體來自禾木科，茄科，十學(xué)花科的植物細胞。

34、根據(jù)權(quán)利要求33的方法，其中的原生質(zhì)體來自禾本科植物的細胞。