[其他]菠蘿蛋白酶的新提取方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 87100106
• 申請(qǐng)日: 1987-01-14
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN87100106A
• 公開(kāi)（公告）日: 1988-08-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李立釗;王克誠(chéng);楊正宗
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京市營(yíng)養(yǎng)源研究所;廣西防城縣罐頭食品廠
• 主分類號(hào): C12N9/50
• 分類號(hào): C12N9/50
• 代理公司: 北京市科技專利事務(wù)所
• 代理人: 李維第

本發(fā)明涉及一種從菠蘿加工下腳料中提取菠蘿蛋白酶的新方法。

菠蘿果實(shí)及莖葉中含有豐富的菠蘿蛋白酶。它在食品、醫(yī)藥、紡織、皮革等工業(yè)中有著廣泛的應(yīng)用，特別在啤酒行業(yè)，用于啤酒改良風(fēng)味，提高品質(zhì)，添加1ppm即可有明顯效果，但目前國(guó)內(nèi)生產(chǎn)供不應(yīng)求。

在菠蘿罐頭生產(chǎn)中，菠蘿加工下腳料，包括芯、皮、刺等，量很多，約占原料重量的45～50%，以往，此均作為廢物丟棄，既浪費(fèi)了資源又污染了環(huán)境。若能利用此下腳料生產(chǎn)果汁，并從中回收菠蘿蛋白酶，既能夠避免浪費(fèi)，又將減少環(huán)境污染，事實(shí)上人們已經(jīng)這樣做了。但問(wèn)題是采取的方法，還有較多不足之處。

目前國(guó)內(nèi)采用的提取菠蘿蛋白酶方法，有高嶺土吸附法與單寧沉淀法，但二者均有不足之處，前者使用吸附劑量較大（約5%），后者雖工藝簡(jiǎn)單，但所得酶單位較低，且不能回收利用果汁。又二者制成的酶純度均較低。針對(duì)上述不足，本發(fā)明的目的在于尋找一較好工藝，既能回收活性高的酶，也能夠充分利用果汁，實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，本發(fā)明方法達(dá)到了上述目的。

本發(fā)明采用一種高分子量化合物聚丙烯酸作為沉降劑將果汁中的菠蘿蛋白酶沉淀，然后沉淀用水懸浮，調(diào)節(jié)PH值、解析，然后用Ca⁺⁺將聚丙烯酸除去，再經(jīng)鹽析，得菠蘿蛋白酶成品。

由于聚丙烯酸（或其鹽）分子量很大（一般幾萬(wàn)到幾百萬(wàn)），且在酸性介質(zhì)中羧基解離，使分子帶有大量負(fù)電荷，而菠蘿蛋白酶分子表面則帶有正電荷，而果汁的酸度恰好在這一范圍（PH3-4），因此，只要在果汁中添加千分之一到萬(wàn)分之一的聚丙烯酸（或其鹽）即與酶形成一復(fù)合物，由于凝絮作用而沉淀，收集沉淀用少量水懸浮，調(diào)PH5-8沉淀即溶解，在過(guò)量Ca⁺⁺的存在下聚丙烯酸形成不溶性的鈣鹽而除去，溶液再經(jīng)鹽析，即可得到菠蘿蛋白酶成品。

實(shí)施例1

將菠蘿芯、皮等下腳料榨汁，加適量苯甲酸防腐，澄清后，取1000ml加入10%聚丙烯酸鹽溶液3-4ml攪拌30分鐘，靜置一段時(shí)間后，虹吸出上層清液，留下約十分之一體積沉淀液，離心、清液與虹吸上清液合併，沉淀用50ml蒸餾水懸浮，用飽和碳酸鈉溶液調(diào)PH6-8攪拌20-30分鐘，加入10%氯化鈣溶液5ml，繼續(xù)攪拌20-30分鐘，再次離心，則聚丙烯酸成鈣鹽而除去，上清液用硫酸銨鹽析，獲得菠蘿蛋白酶成品，比活力90萬(wàn)福林單位/克。

實(shí)施例2

步驟同實(shí)施例1，不同之處為榨汁10000ml用聚丙烯酸鹽沉淀后，虹吸出上層清液，留下約1000ml沉淀液（十分之一體積），后者用飽和碳酸鈉調(diào)PH4.8～5.1，加入5%食鹽（W/V，50克）攪拌20-30分鐘，按重量加入20%硫酸銨鹽析，過(guò)濾，濾餅用硫酸銨溶液洗去糖分，濾干，40℃真空干燥，得菠蘿蛋白酶成品14～15克，比活力80-90萬(wàn)福林單位/克。