[其他]赤豆葉肉原生質體分離培養與綠苗分化技術

無效

• 申請號: 87101002
• 申請日: 1987-03-25
• 公開（公告）號: CN87101002A
• 公開（公告）日: 1988-03-30
• 發明（設計）人: 葛扣麟;王韞珠;袁勛梅;黃培銘;楊金水;聶志平
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: C12N5/00
• 分類號: C12N5/00
• 代理公司: 復旦大學專利事務所
• 代理人: 華以正,陸飛

1、一種從赤豆無菌苗游離和培養葉肉原生質體的方法，其特征是原生質體培養基成份中采用0.5至0.65M濃度的葡萄糖作為碳源和滲透壓穩定劑，原生質體分裂形成愈傷組織，再擴增，分化成綠苗。

2、按照權利要求1所述的原生質體培養基，其特征是培養基的無機鹽成份中含有600-1000mg/L的CaCl₂·2H₂O，1200-1500mg/L的KNO₃，200-300mg/L的NH₄NO₃，60-90mg/L的KH₂PO₄，600-900mg/L的MgSO₄。

3、按照權利要求1所述的原生質體培養基，其特征是培養基的維生素成份中含有0.02-0.08mg/L的生物素，0.1-0.8mg/L的葉酸，100-200mg/L的肌醇，3.0-3.5mg/L的鹽酸硫胺素，0.5-0.8mg/L的鹽酸吡哆素，1.0-2.0mg/L的甘氨酸，3.0-4.0mg/L的煙酸。

4、按照權利要求1所述的原生質體培養基，其特征是培養基的植物激素成份中含有2，4-二氯苯氧乙酸，α-萘乙酸，6-芐氨基嘌呤和玉米素，上述植物激素的用量各為0.3-1mg/L。

5、按照權利要求1所述游離原生質體的方法，其特征是混合酶解液成份中含有0.5%-1%（W/V）的纖維素酶，0.5%-1%（W/V）的半纖維素酶，酶解葉片的溫度是25°-27℃，經酶解12-16小時后用400目不銹鋼絲網過濾得原生質體。

6、按照權利要求1所述的游離原生質體的方法，其特征是原生質體的取材來自生長11-16天，生理狀態良好的無菌苗真葉。

7、按照權利要求1所述的原生質體誘導愈傷組織擴增的方法，其特征是擴增培養基中含有0.2-0.5mg/L的6-芐氨基嘌呤，1-3mg/L的2，4-二氯苯氧乙酸，每10-15天轉接一次。

8、按照權利要求1所述的愈傷組織分化方法，其特征是分化培養基的植物激素成份中含有1-5mg/L的6-芐氨基嘌呤。

9、按照權利要求1所述的愈傷組織分化培養的方法，其特征在于采用先短周期轉接，后長周期轉接相結合的方法。

10、按照權利要求1所述的愈傷組織分化培養方法，其特征在于愈傷組織是在長波長500-700nm的生長燈的光照下分化的。