[其他]對基因探針的改良

無效

• 申請號: 87102927
• 申請日: 1987-03-18
• 公開（公告）號: CN87102927A
• 公開（公告）日: 1988-04-27
• 發明（設計）人: 亞歷克·約翰·杰弗里斯
• 申請（專利權）人: 帝國化學工業公司
• 主分類號: C12N15/00
• 分類號: C12N15/00;C12P19/34;G01N33/53
• 代理公司: 中國專利代理有限公司
• 代理人: 林玉貞,曹恒興

本發明總地涉及多核苷酸和DNA及RNA探針、它們的制備以及它們在遺傳特性鑒定中的應用。這些用途例如可以包括證實人、動物或植物的來源，因而本發明的多核苷酸和探針可以在例如父親身份爭異或法醫學中或者在遺傳病或遺傳素因的予防、診斷和治療方面得到應用。

在英國專利申請NO8525252（公開號2166445）中描述了多種DNA序列，這些序列可以用來作為探針在人和動物基因組內的許多多態性位點處分別雜交，使得能夠產生由標記的不同分子量的帶構成的“指紋圖”。這種指紋圖總體上是有關的個體的特征，通過個體的譜系可以追溯這些不同譜帶的來源，在某些情況下其來源可以假定為與某些遺傳病有聯系。

本發明是基于這樣一個發現，即通過使用多位點探針在基因組中可以識別信息性基因位點，并且可以制備出一些多核苷酸及多核苷酸探針，其中每個對于這樣的單一的信息性基因位點是特異的。

迄今為止，在人體DNA中只發現了數量有限的高可變位點，這些位點包括：胰島素基因的5′小隨體（minisatellites）（Bell、Selby和Rutter，1982）;C-Ha-rasl基因的3′小隨體（Capon等，1983），Ⅱ型膠原基因（Stoker等，1985）和ξ2與ψξ1珠蛋白基因之間的區域（Goodbourn等，1983），以及由染色體14之長臂的終端區得到的無名DNA克隆所限定的D14S1位點（Wyman和White，1980;Balazs等，1982;Wyman、Wolfe和Botstein，1984）。這些小隨體的變異性有實質性差異，其范圍從在膠原高可變區檢測到的僅僅6個不同的等位基因（Sykes、Ogilvie和Wordsworth，1985）到在D14S1位點處的80多個（Balazs等，1986）。人的基因組中的高可變位點的總數有多少目前還不知道，但這個數字有可能很大。人的基因組可能含有至少1500個高可變區。

業已發現，有可能克隆一個通過將基因組DNA的片段同某多核苷酸探針雜交所鑒定的DNA片段，上述探針是能夠通過參考一種以上的多態性小隨體區或高可變位點鑒別DNA的多核苷酸探針，例如在前面所述的英國專利申請No.8525252（公開號2166445）中所描述并提出權利要求的探針33.6和33.15;并可以由其制備出能夠雜交到一DNA片段上的多核苷酸或探針，該DNA片段含有一個對于基因組中的某特定區域或位點為特異的小隨體，而所說的區域或位點是一個可以提供信息的基因位點。在本說明書中我們將提供信息的基因位點定義為：在任何100，個隨機選取的無關個體的樣品中的該位點處可以鑒別出至少3個不同的等位基因。本文中將這一含義表述為，該位點具有至少3（100）個等位基因變異。隨機選取的無關個體的樣品數較好為500個，最好是1000個。在本文中將在這樣一些樣品中區分出至少3個不同的等位基因的能力分別稱為3（500）和3（1000）。重要的是這100、500或1000個隨機選取的無關個體的樣品必須確實是隨機選取的，因為通常情況下通過篩分總人群中的足夠大數量的樣本，可以鑒別100、500或1000個在給定的提供信息之基因位點上具有3個以下等位基因的個體。

在一個給定的提供信息的基因位點處，這種多態性越高，這種位點特異的探針在遺傳特性鑒定中（例如為確定父親身份或法醫鑒定而進行個體鑒別時）就越有用并且提供更可靠的信息。

在這方面，可將上述“個體”一詞理解為不僅用來指人，而且還指動物和植物以及由這些人、動物和植物得到的細胞系。但是在每一種情況中，隨機選取的無關個體的樣品應該都是取自同一物種。

就本發明應用于人的情況而言，本文中所使用的“信息性基因位點”這一表述可以換一種方式定義為：一個基因位點，在該位點處在從選自下列任何20個細胞系〔這些細胞系已經寄存在美國典型培養物保藏中心（ATCC）〕中提取的DNA中可以區分出至少3個不同的等位基因。

細胞系????ATCC寄存號

Hela????CCL2

RPMI2650????CCL30

Detroit532????CCL54

Detroit525????CCL65

Detroit529????CCL66

Detroit510????CCL72

WI-38????CCL75

Citrullinemia????CCL76

EB-3????CCL85

RAJI????CCL83