[其他]鏈結合的方法

無效

• 申請號: 87104447
• 申請日: 1987-06-23
• 公開（公告）號: CN87104447A
• 公開（公告）日: 1988-02-10
• 發明（設計）人: 約翰·帕里·波尼爾;波兒·道格拉斯·約翰斯通
• 申請（專利權）人: 基因技術公司
• 主分類號: C07K7/16
• 分類號: C07K7/16;A61K37/24
• 代理公司: 上海專利事務所
• 代理人: 王孫佳

本發明提供一種將人類松弛素的A鏈和B鏈或者人類松弛素的A鏈類似物和B鏈類似物進行結合，以有效的產率產生具有生物活性的人類松弛素或人類松弛素類似物產物的方法。具體地說，本發明包括在PH值大于7.0，并且在使人類松弛素B鏈溫和變性的條件下，將還原的人類松弛素A鏈及B鏈或它們的類似物發生結合的方法。通過將混和物維持在自15℃至30℃左右的溫度下，并在反應過程中逐漸地暴露于空氣氧中，為此該條件提供了一個形成具有生物學活性的人類松弛素或其類似物的環境。本發明也提供具有生物學活性的人類松弛素的類似物。本發明還進一步提供一種以人類松弛素或其類似物作為唯一活性劑用以引產的方法。

人類松弛素是一種卵巢肽可在分娩前使產道發生變化，從而促進分娩出生過程。Hisaw，F.L.，Pros.Soc.Exp.Biol.Med.23，661-663（1926），Schwabe，C.etal.Biochem.Biophys.Res.Comm.75，503-570（1977）;James，R.etal;Nature????267，544-546（1977）。松弛素在懷孕期發性激素中占支配地位，但在非孕期女性及男性中也檢測出它的存在。Bryant-Greenwood，GD.，Endocrine????Reviews????3，62-90（1982）and????Weiss，G.，Ann.Rev.Physiol.46，43-52（1984）。

取自于豬、鼠、虎鯊（Tiger????shark）角鯊及人類的松弛素的氨基酸順序已經被建立。該激素由二條肽鏈組成，稱為A鏈及B鏈，并以雙硫鍵相連接，A鏈上有一鏈內雙硫鍵因而以此方式與胰島素A鏈相似。然而，松弛素與其它肽類激素，包括胰島素在內的驚奇而又重要的區別在于它的令人注意的由于種源的不同造成化學結構的變異。例如，豬、鼠及人類松弛素有50%以上的氨基酸位置是不同的。這些區別解釋了不同種的松弛素之間低的免疫交叉反應性和許多其它觀察到的專一性生物活性上的區別。

DNA重組技術的應用已經使得人們能對編碼人類松弛素的基因進行分離并確定其特性。Hudson，P.et????al.，Nature????301，628-631（1984）and????Hudson，P.et????al.，The????EMBO????Journal????3，2333-2339（1984）.對c????DNA及基因組克隆核苷酸順序的分析揭示了人類松弛素的結構組織包括一個信號肽，具有25個殘基，隨后有一個大約32至33個氨基酸的B鏈、一個大約有105個氨基酸的C肽及一個24氨基酸的A鏈。對于人類松弛素，有一個基因內區擾亂了C肽的編碼區域。比胰島素C肽長得多的松弛素C肽的生理作用及負責從A鏈及B鏈端除去C肽的酶的性質尚未弄清楚。

對于人類的松弛素而言，有兩個獨立的基因順序已經被確定了。Id.在懷孕期這些基因中僅有一個基因（H2）在卵巢中獲得表達，然而究竟其另一個的基因在其它組織位點被表達呢，或是它代表了一個假基因呢，這一點還不清楚。人類的這兩個松弛素基因在核苷酸及氨基酸上顯示了互相間的相當多的同系性，尤其是對于B肽及C肽而言。然而，也存在著一些值得注意的順序上的歧異，特別是在A鏈及B鏈的末端氨基區域。參見圖1。從H2松弛素在卵巢中被合成及得到表達的這一事實，可推測該順序參與了孕期生理變化。最近的論文中，報導了約翰斯通等（Johnston????et????al.，）曾對合成的人類松弛素（H2）及某些人類松弛素類似物的生物學活性進行了測定。Johnston，P.D.et????al.，In????Peptides：Structure????and????Function，Proc.，Ninth????American????Peptide????Symposium，Deber，C.M.，Hruby，V.I.and????Kopple，F.D.（eds.）（Pierce????Chem.Co.，1985）他們確定了對于生物學活性所必需的松弛素核心及可替代甲硫氨酸而不影響其生物活性的某些氨基酸。

Id。