[其他]用作疫苗和診斷標記的淋病奈瑟氏菌植物凝血素及其制備方法

無效

• 申請號: 87104828
• 申請日: 1987-06-18
• 公開（公告）號: CN87104828A
• 公開（公告）日: 1988-05-04
• 發明（設計）人: 卡羅林·D·迪爾;馬達琳·Y·H·蘇;H·史蒂文·塞弗特
• 申請（專利權）人: 斯克里普斯臨床學與研究基金會
• 主分類號: C12N15/00
• 分類號: C12N15/00;C12N1/20;C12P21/00;A61K37/46;G01N33/571
• 代理公司: 中國專利代理有限公司
• 代理人: 曹恒興,王巍

本發明有關一種適用于抗淋病奈瑟氏菌（Neisseria????gonorrhoeae）的接種物或疫苗的植物凝血素，有關一種含有植物凝血素的疫苗，及有關診斷淋病的方法。具體地說，本發明有關可從淋球菌得到的淋病奈瑟氏菌植物凝血素，并有關分離凝血素的方法，有關從它們制備的一種接種物和/或疫苗;以及有關生產上述凝血素的方法。

據報導因淋病奈瑟氏菌（N.g）感染，年發病率估計有200萬例。人體中淋球菌感染通常導致相對未并發的泌尿生殖系統的感染。又報導了在淋病方面，因淋病菌傳播感染發病率達1-3%，但是這類疾病癥狀用現行的治療方法效果很差。

另一方面，在婦女中因淋病感染，輸卵管炎的發病率占10-20%，甚至在適當治療后，可能產生輸卵管炎復發、子宮外孕和不育癥。估計在美國每年因輸卵管炎導致有180萬職員請私人醫生治療，有22萬人住院治療。

依靠公共衛生措施控制淋病至今還是困難的。Greenburg等在“世界衛生組織通報”45：531頁1971年發表文章“開展淋球菌疫苗的初步研究”報導了由全部殺死的淋球菌制成的疫苗毫無療效。

抗淋球菌的青霉素和四環素菌株也已問世。

淋球菌感染包括由細菌粘膜的移生，一種依靠移生細胞粘合力傳遞至膜表面的過程。術語“粘合力”意指細菌附著于表面比較穩定。有如此粘附活性任何可靠結構都稱做粘接物。

淋球菌傘毛是一種具有由相同重復亞單元）傘毛蛋白-pilin）組成的絲狀結構的粘著物。在N.g的MS11菌株中，每個傘毛蛋白的分子量約18，000道爾頓，淋球菌與上皮表面結合可能被抗傘毛抗體封阻。除封阻細胞的結合外，對傘毛蛋白產生的抗體也就是調理素，即它們通過血液中的各噬細胞，殺死侵入細菌。然而，由于缺乏通過不同N.g菌株形成的傘毛的血清交叉反應，因而提出使用傘毛免疫劑作為疫苗是不實際的。

我們發現，真核生物細胞表面糖〔神經〕鞘脂類，如：乳糖基神經酰胺，異球丙糖基神經酰胺（isoglobotri????sylcetamide），神經節丙糖基神經酰胺（gangliotriocylcoramide）和神經節丁糖基神經酰胺（gangliotetraosylceramide），均包括在N.g.的識別和粘合力之中，此外，還發現糖脂的直接識別可借助于至今未報導過的細菌植物凝血素，一種具有能識別特殊糖類系列（碳水化合物結構）并與之結合的細菌蛋白。這種細菌植物凝血素，當用于接種物、疫苗的組成，或用于診斷鑒定時，沒有上述提到的傘毛免疫劑的缺點。

本發明企圖分離名為GCL-1的細菌植物凝血素。這種植物凝血素可從淋球菌中得到，并與真核生物糖類相結合，相對分子量約為22400道爾頓。該植物凝血素的等電點pH值約6.1-6.4，它具有與神經節丁糖基神綠酰胺特殊結合的能力，并用作為抗淋病的接種物和疫苗的組成。這種植物凝血素也用于淋病的診斷方法。這種植物凝血素可以其分離形式或其在藥物上可接受的鹽的形式使用。

另外，本發明旨在由上述提到的分離的植物凝血素或其在藥物上可接受的鹽及其在藥物上可接受的載體組成的接種物和疫苗。還提出一種抗淋球菌感染的免疫方法，即通過給病人施用有效量的、在藥物上可接受的載體或稀釋劑中含有上述分離的植物凝血素或其鹽。

本發明進一步提出了分離GCL-1植物凝血素的DNA片段及存在于生物宿主和培養物中同樣的DNA片段，在該培養物中上述生物宿主同適宜于表達GCL-1編碼基因的該GCL-1編碼基因存在于表達載體中，同時包含在合適的表達介質中。

附圖系本發明的公開部分：

圖1是涂銀的具有標記蛋白質分子量位置的12%十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳的（SDS-PAGE）凝膠照片，并以其各自的相對分子量以1千道爾頓為單位表示在圖的右面。

帶A含具有相對分子量約18000道爾頓的純傘毛蛋白。

帶B含有本發明從實例1得到的粗品GCL-1提取物中親合吸收后剩余的蛋白質樣品。在檢測方法的范圍水平內沒有證明GCL-1的存在。然而，在18000分子量的位置上可以看到傘毛蛋白。

帶C含有存在于22400道爾頓位置上親合分離的GCL-1。不存在大量傘毛蛋白或與其相結合的蛋白。

帶D含有按實例1敘述的須經紅細胞糖苷脂親合分離的粗品GCL-1萃取溶液洗脫液。該溶液用作對照檢測與糖脂親合基質的非特異結合。在該帶中不存在顯著量的GCL-1，表明GCL-1與神經節丁糖基神經酰胺親合基質的結合是一種特殊的植物凝血素-配位體相互體作用。