[其他]含有粒性的白細胞集落刺激因子的穩定藥劑及其生產方法

無效

• 申請號: 87104963
• 申請日: 1987-07-18
• 公開（公告）號: CN87104963A
• 公開（公告）日: 1988-02-24
• 發明（設計）人: 町田實
• 申請（專利權）人: 中外制藥株式會社
• 主分類號: A61K37/02
• 分類號: A61K37/02
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利代理部
• 代理人: 辛敏忠

本發明是關于一種含粒性白細胞集落刺激因子的制劑。本發明特別與一種含粒性白細胞集落刺激因子的穩定藥劑有關，這種藥劑可以防止活性組分（例如粒性白細胞集落刺激因子）由于裝制品容器壁吸附，或結合，聚合乃至氧化而失活或丟失。

化療是治療多種感染疾病的一種方法，但是近來發現，化療會引起某些嚴重的臨床問題例如耐藥菌的形成，病原菌的變化以及嚴重的付作用。為了避免與化療有關的這些問題，包括例如抗生素，殺菌劑等化療劑的應用，因此想采用一種能夠活化感染菌宿主予防能力的物質，從而使前述化療問題能全部解決。在宿主的多種予防能力中，白細胞的吞噬細菌作用在細菌感染的初期據信影響最強，因此可以設想通過促進中性白細胞的生長，分化進入成熟期可以大大加強宿主的抗感染能力。粒性白細胞集落刺激因子（G-CSF）是具有上述作用的一種十分有用物質，并且本發明的同一受讓人過去曾遞交過一份有關利用G-CSF作為一種抗感染藥的專利（日本專利申請No23777/1985）。

如上所述，當前進行的化療存在著多種不可避免的問題，因此正在盡力采用能夠活化宿主或感染病人予防能力的藥物。無可置疑，G-CSF本身具有活化宿主予防作用的能力，而且還發現，如果將其與能活化宿主予防能力的一種物質合并應用于臨床的話，G-CSF則會有極大療效。

G-CSF用量極少，G-CSF含量為0.1-500微克（最好為5-50微克）的藥物服用劑量通常為每個成年人每周1-7次。但是G-CSF易于被容器例如安瓿或注射器壁所吸附。因此如果藥物以這種水溶液形式注射的話，它便會被吸附于其容器例如安瓿或注射器壁上。這樣一來由于吸附可能導致的損失結果使得G-CSF既不能充分表現藥物的活性，也使得必須加入超過需要量的G-CSF。

此外，G-CSF不穩定，對環境因素例如溫度，濕度、氧和紫外線高度敏感。由于這些因子的作用，G-CSF可發生物理或化學變化，例如結合，聚合，和氧化并且大大喪失活性。如果以十分精確的方式，極少量地服用G-CSF的話，這些現象會導致難以完全起到治療作用。

因此需要發展一種穩定的G-CSF藥劑，它能夠充分防止其有效組分活性下降。這就是提供一種穩定G-CSF藥劑的本發明主要目標。

本發明人為了提高含有G-CSF藥劑的穩定性，進行了深入的研究，并且發現如果加入可藥用的表面活性劑、糖類、蛋白質或高分子量化合物則可以有效達到這個目的。

因此，本發明含有G-CSF的穩定藥劑可以被G-CSF和從藥用表面活性劑、糖類、蛋白質和高分子量化合物中挑選的至少一種物質來定性。

采用例如日本專利申請No153273/1984，269455/1985，269456/1985，270838/1985，270839/1985說明書敘述的任何方法可以得到含有G-CSF的本發明藥劑。例如可以通過培養患口腔癌病人瘤細胞的一種細胞株（CNCM登記號I-315或I-483）或者在一種適當的宿主細胞中（例如大腸桿菌，C127細胞或中國倉鼠卵巢細胞）通過重組DNA（是采用人G-CSF編碼基固作用制備得到的）表達來制備人的G-CSF。

任何高度提純的人G-CSF都可以作為G-CSF加至本發明的藥劑中。最好是從一種產生人G-CSF的培養細胞上清液中分離人的G-CSF，并且還可以從一種含有人G-CSF活性多肽編碼基因的重組載體轉化過的宿主中得到一種具有人G-CSF活性的多肽或糖蛋白。

兩例最好的人G-CSF例子如下：

（1）具有下列物理化學性質的人G-CSF：

ⅰ）分子量：采用十二烷基磺酸鈉-聚丙酰胺凝膠電泳測定分子量大約為19，000±1，000。

ⅱ）等電點：在PI＝5.5±0.1，PI＝5.8±0.1和PI＝6.1±0.1三個等電點中至少有一個是其等電點。

ⅲ）紫外吸收：最大吸收值在280nm，最小吸收值在250nm。

ⅳ）N末端21個殘基氨基酸順序為：

H₂N-蘇-脯-亮-甘-脯-丙-絲-絲-亮-脯-谷氨酰胺-絲-苯丙-亮-亮-賴-胱-亮-甘-谷氨酰胺-纈-

（2）人G-CSF或是具有人粒性白細胞刺激因子活性的一種多肽，此多肽是部分或全部以下述氨基酸序列表達的。或是一種含有所敘多肽和一個糖鏈部分的一種糖蛋白。

（Met）_nThr Pro Leu Gly Pro Ala Ser Ser Leu Pro