[其他]純化的胎兒胸腺嘧啶脫氧核苷激酶

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 87105215
• 申請日: 1987-07-30
• 公開（公告）號: CN87105215A
• 公開（公告）日: 1988-02-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 彼里·尼科拉斯·約安
• 申請（專利權(quán)）人: 法國德巴實(shí)驗(yàn)室公司
• 主分類號: C12N9/12
• 分類號: C12N9/12;A61K37/52;A61K39/395;G01N22/577
• 代理公司: 中國國際貿(mào)易促進(jìn)委員會專利代理部
• 代理人: 顧柏棣,李瑛

1、一種制備純化的胎兒胸苷激酶(TK-F)方法，該TK-F具有大于或等于每毫克5000單位的酶活力，該方法包括將待純化TK-F與胸苷偶聯(lián)，再切開得到的胸苷/TK-F復(fù)合物，該方法的特征在于：

a)把待純化的TK-F與予先固定于適當(dāng)?shù)牡谝惠d體上的胸苷相接觸將TK-F與胸苷偶聯(lián)，

b)以這種方式結(jié)合的TK-F用含有胸苷的適當(dāng)溶劑洗脫。

c)以這種方式洗脫的胸苷/TK-F用第二載體切開，第二載體不同于第一載體并從該胸苷/TK-F復(fù)合物上選擇性吸收胸苷。

2、根據(jù)權(quán)項(xiàng)1的方法，其中第一載體是環(huán)氧-瓊脂糖。

3、根據(jù)權(quán)項(xiàng)1的方法，其中未停留在已偶聯(lián)了胸苷的第一載體上的蛋白質(zhì)類型的雜質(zhì)，用下述緩沖液洗脫：10mM Tris，10mM Mg Cl₂，5μM Na F，0.4mM pH7.5的β-巰基乙醇和10mMATP。

4、根據(jù)權(quán)項(xiàng)1的方法，其中固定在載體偶聯(lián)的胸苷上的TK-F被下述緩沖液洗脫：10mM Tris，10mM Mg Cl₂，5μM NaF，0.4mM β-巰基乙醇，1mM ATP和10mM pH7.5的胸苷。

5、根據(jù)權(quán)項(xiàng)1的方法，其中第二載體是包括1%重量木炭，0.1%重量葡聚糖和0.2%重量明膠溶于10mM??pH7.5的Tris-HCl緩沖液的組合物。

6、根據(jù)權(quán)項(xiàng)1的方法，得到純化的TK-F的酶活力大于或等于8000單位/mg。

7、根據(jù)權(quán)項(xiàng)2-5的方法，得到一純化的TK-F的酶活力大于或等于每毫克10，000單位。

8、根據(jù)權(quán)項(xiàng)7的方法，得到純化的TK-F具有：（ⅰ）酶活力約11，800單位/mg;（ⅱ）pH值在8.6時，電泳Rf值約為0.15。