[其他]單個(gè)雙層的脂質(zhì)體的制備方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 87105547
• 申請(qǐng)日: 1987-07-15
• 公開（公告）號(hào): CN87105547A
• 公開（公告）日: 1988-05-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 弗里茨·霍·博勒;羅蘭·拉·尼德爾
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 西拉格有限公司
• 主分類號(hào): A61K9/10
• 分類號(hào): A61K9/10;A61K47/00;A61K31/415
• 代理公司: 中國專利代理有限公司
• 代理人: 楊九昌,魏金璽

本發(fā)明涉及單個(gè)雙層脂質(zhì)體的制備方法。更具體地說，本發(fā)明涉及一種生產(chǎn)單個(gè)雙層并含有囊包生物活性物質(zhì)的脂質(zhì)體的改進(jìn)方法。

脂質(zhì)體在文獻(xiàn)中作了廣泛地?cái)⑹觯鼈兊慕Y(jié)構(gòu)是眾所周知的。它們由親水脂分子如極性脂質(zhì)所組成，其中包括磷酯酰膽堿、乙醇胺和綠氨酸、神經(jīng)磷脂、心磷脂、質(zhì)脂、磷脂酸和腦苷脂。使磷脂或其他合適的親水脂分子在水或水溶液中膨脹以生成液晶可形成脂質(zhì)體，它通常是多層結(jié)構(gòu)，由被水相物質(zhì)彼此分開的許多雙層結(jié)構(gòu)組成。另一類型的脂質(zhì)體是眾所周知的，它由單個(gè)的含有囊包水相物質(zhì)的雙層結(jié)構(gòu)組成，也可稱為單層小泡。在脂類膨脹時(shí)，如果水相中含有水溶性物質(zhì)，它們就陷入雙層脂質(zhì)之間。

最近幾年，應(yīng)用脂質(zhì)體作為化合物載體有很大的興趣，對(duì)這些化合物有興趣是由于它們具有某些生物學(xué)性質(zhì)，比如藥物、蛋白質(zhì)、酶、激素以及診斷劑，此后稱為“生物活性化合物”。

水溶性物質(zhì)被囊包在生物分子層之間的含水空間。脂溶性物質(zhì)被囊包在脂層中，而極性的頭部基團(tuán)可以伸進(jìn)含水空間里，這些化合物的囊包可通過許多方法來達(dá)到。所用的最普通的方法包含通過有機(jī)溶劑的蒸發(fā)而使磷脂在燒瓶的壁上形成薄膜。當(dāng)這薄膜分散在合適的含水介質(zhì)中就形成了多層脂質(zhì)體（亦稱為粗脂質(zhì)體）。進(jìn)行合適的超聲處理后，粗脂質(zhì)體形成較小的類似閉合的小泡。

水溶性的生物活性物質(zhì)通常是使形成的薄膜分散在該化合物的水溶液中而摻入的。未被囊包的化合物用離心、層析、透析或其他一些合適的方法除去。脂溶性的生物活性物質(zhì)通常是在形成膜之前使它們與磷脂一道溶解在有機(jī)溶劑中而摻入的。如果這些物質(zhì)在脂相中的溶解性不超過能與脂質(zhì)結(jié)合的數(shù)量因而沒有多余的物質(zhì)存在，則用上述方法制備的脂質(zhì)體，通常包含結(jié)合在脂雙層中的大多數(shù)物質(zhì);脂質(zhì)體與未囊包物質(zhì)的分離就不需要了。

脂質(zhì)體是包含一個(gè)或多個(gè)分散在水或電解質(zhì)水溶液里的脂質(zhì)層的脂質(zhì)小泡。雖然它們被廣泛地用于各種目的囊包生物活性物質(zhì)，但脂質(zhì)體通常用作藥物的載體。所利用的脂質(zhì)體有各種類型，它們由于脂質(zhì)體的數(shù)目、大小、表面電荷、脂質(zhì)組成及制備方法而不同。

Bangham等人描述了制備多層脂質(zhì)小泡的一種方法〔（J.Mol.Biol.13：238-252（1965）〕。多層脂質(zhì)小泡由許多被含水介質(zhì)相互分散的雙分子層組成。脂類和親脂性物質(zhì)首先溶解在有機(jī)溶劑中，溶劑在減壓下通過施轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去，殘余脂質(zhì)在容器壁上形成一層薄膜。加入通常含有電介質(zhì)或親水性生物活性物質(zhì)的水溶液，攪拌混合物時(shí)則形成大的多層脂質(zhì)體。大的多層小泡通過超聲處理能制備小的單層小泡。

另一種方法是，使脂類和水溶液的混合物加熱，再進(jìn)行劇烈攪拌及超聲振動(dòng)。O.Zumbuehl和H.G.Weder敘述了一個(gè)方法，其中脂類和添加物通過振動(dòng)或超聲處理溶于去污劑中，產(chǎn)生一定的混合膠粒。去污劑用透析法除去〔（Biochem.Biophys.Acta.640：252-262。（1981）〕。最近，在美國專利4235871中描述了用反相蒸發(fā)技術(shù)制備大的單層脂質(zhì)小泡的方法。通過這個(gè)技術(shù)形成油包水型乳劑。在減壓下除去有機(jī)溶劑，產(chǎn)生有膠狀特性的混合物，它能通過攪拌或通過分散在含水介質(zhì)中轉(zhuǎn)化為脂質(zhì)小泡。

制備單層小泡的幾種技術(shù)已有報(bào)導(dǎo)。例如，對(duì)磷脂的水相分散體進(jìn)行超聲處理產(chǎn)生由雙層組成的或由磷脂包圍水相空間的微小泡。〔（Papahad-Joponlos和Miller，Biochem.Biophys????Acta.，135：224-238（1968）〕。

所有上述方法在實(shí)驗(yàn)室規(guī)模上產(chǎn)生可重復(fù)的脂質(zhì)體。用已知的步驟依賴現(xiàn)有設(shè)備擴(kuò)增為生產(chǎn)規(guī)模常常是困難或完全不可能的，這部分是由于很難重復(fù)產(chǎn)生脂質(zhì)體生成的物理?xiàng)l件。克服此問題的一個(gè)方法包括使用由D.Deamer和A.D.Bangham〔（Biochem.Biophys.Acta;443：629-634。（1967）〕所敘述的乙醚灌輸技術(shù)。在此過程中含脂的乙醚快速注射到60℃的緩沖液中，當(dāng)乙醚蒸發(fā)后則自動(dòng)形成單層脂質(zhì)體。注射方法簡單而且快速，但產(chǎn)生的脂質(zhì)體制品的濃度相對(duì)較低，而且囊包的效率較低。

制備小的單層小泡而避開超聲處理的另一個(gè)方法是乙醇注射技術(shù)〔（S.Batzri和E.D.Korn.Biochem.Biophys.Acta;298：1015-1019，（1973）〕。通過向水中注射磷脂的乙醇溶液的方法制備單個(gè)雙層脂質(zhì)體，懸液用超過濾濃縮，乙醇用透析法除去。

美國專利4206197中敘述了包膜化學(xué)物質(zhì)的方法，使脂肪與水溶性溶劑、表面活性劑及需包膜的化學(xué)物質(zhì)混合。然后，將溶液加壓注射至水相中，但用這種方法所形成的產(chǎn)品是膠狀懸液。