[其他]大豆屬物種的變性、體胚胎發生及全植物再生的方法

無效

• 申請號: 87106206
• 申請日: 1987-08-04
• 公開（公告）號: CN87106206A
• 公開（公告）日: 1988-07-27
• 發明（設計）人: 格倫B·柯林斯;戴維F·希爾德布萊德;保羅A·勞澤立;托馬斯R·亞當斯;韋恩A·帕羅特;林M·哈特韋克
• 申請（專利權）人: 盧布瑞遺傳公司
• 主分類號: A01H1/06
• 分類號: A01H1/06
• 代理公司: 上海專利事務所
• 代理人: 全永留

發明領域：

本發明涉及一種從大豆和其他大豆屬物種的體組織中使全植物變性和再生的方法。

交叉參考所涉及的申請：

本申請是待批申請（No.893256，申請日：1986年8月4日）的續篇。

發明的技術背景：

培養體組織以實現大豆及其親緣物種再生的方法已經歷了長時間的探索。大豆與易再生的物種如煙草和矮牽牛不同，以往從體組織再生全植物的償試碰了壁。這些方法在借助于體細胞的無性變異，將所希望的特性誘導入大豆或其他能夠與之繁殖的物種〔如野大豆（G.soja）〕方面非常有用。這些方法對基因工程師們也是有益的，通過土壤桿菌感染或其他手段使細胞變性，所產生的變性細胞含有外源DNA，通過培養，即可再生出具有繁殖種子和表現外源基因能力的全植物。

盡管在采用G.canescens和G.clandestina等野生的親緣物種方面已經取得了巨大的成績，但再生大豆屬亞屬大豆（soja）〔包括G.max（大豆）和G.soja（野大豆）〕的方法很少有進展。見P.A.Lazzeri等人的文章（1985），題目是“從大豆的未成熟子葉組織再生植物的過程”（《植物分子生物學報告》第3卷，第4期，160-167頁）以及D.F.Hildebrand等人的文章（1986），題目是“大豆〔Glycine????max（L.）Merr.〕”《農業和林業的生物技術》第二卷，作物Ⅰ（Y.P.S.Bajaj編緝）283-308頁。

在涉及胚胎發生的文獻中，所描述的大多數處理大豆屬物種的措施是提供一種含有生長素的基本培養基，以這種培養基作為使胚胎發生的誘導培養基。胚胎形成后，即可把它們轉移到一種成熟培養基中，然后再轉移到一種含有細胞動素并降低了生長素含量的培養基中抽枝。但是，使用高濃度的NAA或者協調使用低濃度的碳水化合物和生長素，以前認為無助于獲得正常體胚胎的高頻率。此外，在含有生長素的培養基中，尚未發現或分離出促使體胚胎生長的特殊子葉細胞，而有了這種細胞就能提高大豆（G.max）或其他大豆屬物種的再生的效率。

W.D.Beversdorf等人在“大豆屬物種的組織培養中達到的分化程度”〔（1977）《作物科學》（Crop????Sci.）第17期，307-311頁〕一文中第一次報導了體胚胎的發生，但沒有任何胚胎發芽。Beversdorf等人用含有2，4-D（即2，4-二氯苯氧乙酸）和/或NAA（即α-萘乙酸）以及2%蔗糖的誘導培養基來培養大豆（G.max）和幾種親緣物種的下胚軸或成熟的子葉組織或尖，或者胚胎。他們在一些培養物品上獲得了類胚胎組織，但沒有進一步發育為植株。在含有2毫克/升2，4-D和2毫克/升NAA的培養基中，從56個大豆培養品的胚胎發育而來的子葉組織發育成了“calli”及“非愈合組織”結構。但是，均未進一步發育。

T.Y.Cheng等人發表了一篇文章（1980），題目是“從培養中的大豆子葉莖節片斷再生植物”《植物科學通訊》（Plant????Sci.Lett.）第19卷，91-99頁，該文報導了用經過處理的子葉莖節片斷來刺激培養中的大豆形成多芽。所用的培養基含有3%的蔗糖和0.25微重量克分子濃度（μM）的生長素IBA（即吲哚丁酸）。該方法沒有涉及到體組織的應用，但卻應用了由全能細胞組成的外植體來評價各種培養基的有效程度。這篇文章沒有明確報導能夠獨立生長在土壤里的全植物被再生了。

H.Saka等人在“培養中大豆莖節片斷上刺激形成多芽”〔《植物科學通訊》（Plant????Sci.Lett.）第19卷，193-201頁〕一文（1980）中同樣描述了在G.max大豆莖節或尖上嫩枝芽的形成，其應用的培養基含有生長素IBA和3%的蔗糖或者其他碳水化合物。這項工作沒有涉及體組織的應用，而是應用正常情況下能產生嫩枝的組織來評價各種培養基在導致生長方面的有效程度。該文未報導全植物的再生。

T.Kameya等人發表了一篇文章（1981），題目是“從大豆屬物種的下胚軸切片再生植物”《植物科學通訊》第21卷，289-294頁，該文透露了用G.canescens和G.tomentella的下胚軸在補充有各種濃度的NAA和BA（即6-苯基氨基嘌呤）的MS培養基中培養，以再生正常植物。從包括大豆（G.max）和野大豆（G.soja）在內的八個物種的實驗來看，僅僅從G.canescens的下胚軸切片采用1-5毫克/升BA和0.1-0.2毫克/升NAA時才以高頻率再生出了嫩枝。全植物再生出來了。