[其他]采用雜交測定人體T細胞白血病病毒I和II

無效

• 申請號: 87108073
• 申請日: 1987-11-25
• 公開（公告）號: CN87108073A
• 公開（公告）日: 1988-06-08
• 發明（設計）人: 約翰·約瑟夫·史寧史凱;雪利·依·瓦克;伯納德·波意茲
• 申請（專利權）人: 塞特斯公司;紐約州立大學研究基金會
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;C12Q1/68;C12N15/00
• 代理公司: 上海專利事務所
• 代理人: 全永留

1、一種測定或檢驗核酸順序是否存在的方法，所述核酸順序大量存在于HTLVⅠ或HTLVⅡ核酸，或HTLVⅠ和HTLVⅡ兩者的核酸分離體之中，特別適于HTLVⅠ或HTLVⅡ或HTLVⅠ和HTLVⅡ兩者分離體中的核酸，其核酸順序被懷疑是包含在樣品中，其特征在于該方法包括：

a、用核酸順序的每一鏈的寡核苷酸引物、四種不同的核苷三磷酸、一種聚合作用劑在雜交的條件下，一起或分別處理樣品，對于每一核酸順序鏈，每一引物的延長產物被合成，它與要測定或檢驗的核酸順序的每一鏈互補，這樣，一種引物合成的延長產物，當延長產物從它的補體中分離出來時，可作為合成其他引物的延長產物的模板；

(b)、在變性條件下處理樣品以將引物延長產物從它們的模板中分離出來，如果待測的順序是存在的；

(c)、用寡核苷酸引物處理步驟(b)中的產物，將步驟(b)中所產生的每一條單鏈作為模板合成引物延長產物，結果擴增了要測定的順序，如果它是存在的話；和

(d)、確定要測的順序是否存在于樣品之中。

2、如權利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟（d）包括如下幾步：

（1）向步驟（c）的產物加入一個可與擴增的核酸順序雜交的標記探針;和

（2）確定探針是否已經與核酸樣品中的擴增的順序雜交。

3、如權利要求1或2所述的方法，其特征在于步驟（b）和（c）至少重復一次，而且引物是從HTLVⅠ和HTLVⅡ基因組中的X區中選出的。

4、如權利要求1～3的任一權利要求所述的方法，其特征在于所述的聚合作用劑是從下列酶中選出的一種酶：大腸桿菌DNA聚合酶Ⅰ、大腸桿菌DNA聚合酶Ⅰ的Klenow片斷，反轉錄酶、或一種在暴露到足夠使核酸變性的溫度下仍保持其酶活性以在步驟（a）和（c）的反應溫度下，形成所述的延長產物的酶。

5、如權利要求1～4中任一權利要求所述的方法，其特征在于在步驟（a）之前，樣品用可使樣品中所含有的核酸鏈裸露的試劑處理，所述鏈可同時或隨后分離。

6、如權利要求2所述的方法，其特征在于步驟（2）包括下列幾步：

（1）用對探針順序內某一位置有識別的限制性內切酶消化步驟（d）中的雜交了的混合物;和

（2）確定限制消化物中是否含有與待測定的HTLVⅠ和HTLVⅡ順序或HTLVⅠ或HTLVⅡ順序存在有關的限制片斷。

7、如權利要求6所述的方法，其特征在于步驟（1）和（2）使用了一種含有一個或一個以上具HTLVⅠ和HTLVⅡ病毒基因組或HTLVⅠ或HTLVⅡ病毒基因組的順序的核酸的正控制和/或不含有任何具從HTLVⅠ和HTLVⅡ病毒或HTLVⅠ或HTLVⅡ病毒中得到的核酸的負控制。

8、一種含有擴增核酸順序的組成，所述順序大量存在于HTLVⅠ或HTLVⅡ核酸分離體或HTLVⅠ或HTLVⅡ兩者的核酸分離體中，特別是HTLVⅠ或HTLVⅡ或HTLVⅠ和HTLVⅡ兩者的分離體中的核酸，其特征在于，該組成是這樣產生的：

（a）、用核酸順序每條鏈的寡核苷酸先導物、四種不同的核苷三磷酸和一種聚合作用劑在雜交條件下，一起或分別處理含有所述核酸順序的非擴增形式的樣品，對每一核酸順序，每一引物的延長產物被合成，延長產物基本上是與所要測定或檢驗的核酸順序的每一鏈互補，這樣，從一個引物合成的延長產物，當延長產物從它的補體上分離出來時，可以作為合成其他引物延長產物的模板;

（b）、將引物延長產物從模板分離出來，在模板上，延長產物被合成以產生單鏈分子;和

（c）、用寡核苷酸引物處理步驟（b）中的產物，這樣，用步驟（b）中所產生的每一條單鏈作為模板合成引物延長產物，結果導致了核酸順序的擴增。

9、一種測定和檢驗核酸順序是否存在的裝置，所述核酸順序大量存在于HTLVⅠ或HTLVⅡ核酸或HTLVⅠ和HTLVⅡ兩者核酸的分離體中，特別適于HTLVⅠ或HTLVⅡ或HTLVⅠ和HTLVⅡ兩者的分離體中的核酸，核酸順序被懷疑包含在樣品中，其特征在于該裝置包括：

（a）、一種用于要檢測的核酸順序的每鏈的寡核苷酸引物，它的一種或多種引物基本上與每條特定核酸順序的每條鏈互補，這樣，從一個引物合成的一種延長產物，當延長產物從它的補體中分離出來時，可以作為合成其它引物延長產物的模板;和

（b）、一種能與核酸順序雜交的標記探針。

10、如權利要求9所述的裝置，其特征在于它進一步包括一種聚合作用劑，四種不同的核苷三磷酸中的一種和測定所述探針和所述順序雜交物的手段。