[其他]與結合蛋白相融合的蛋白質的生產及純化

無效

• 申請號: 88101209
• 申請日: 1988-03-10
• 公開（公告）號: CN88101209A
• 公開（公告）日: 1988-12-21
• 發明（設計）人: 灌珠迪;井上弘
• 申請（專利權）人: 新英格蘭生物實驗室公司;坦普爾大學
• 主分類號: C12N15/00
• 分類號: C12N15/00;C12P21/00
• 代理公司: 中國專利代理有限公司
• 代理人: 楊九昌

1、一種生產和純化蛋白質分子的方法，包括：

(a)構建在轉化的宿主細胞中表達雜交多肽的DNA表達載體，該雜交多肽包括蛋白質分子和對一種底物具有專一親和性的結合蛋白或其部分；

(b)將表達載體導入合適的宿主細胞中并使雜交多肽表達；

(c)使轉化細胞產生的雜交多肽和結合蛋白能與之結合的底物接觸；

(d)回收蛋白質分子。

2、權利要求1的方法，其中編碼雜交多肽的DNA含有一個連接DNA片段，它將編碼蛋白質分子的DNA和編碼結合蛋白的DNA連在一起。

3、權利要求1或2的方法，其中的底物是交聯的直鏈淀粉。

4、前述權利要求中任何一項的方法，進一步包括從底物上釋放雜交多肽的步驟，即使結合的雜交多肽與一種取代雜交多肽的物質相接觸。

5、前述權利要求中任何一項的方法，進一步包括從雜交多肽上切下蛋白質分子的步驟。

6、一種用于構建表達載體的融合載體，該表達載體表達一種與待純化的蛋白質分子融合的結合蛋白，包括：

（a）一個編碼結合蛋白或其具有生物活性的部分的DNA片段，該結合蛋白與一種底物具有專一親和性;

（b）一個編碼連接順序的DNA片段，它將編碼結合蛋白的DNA和編碼蛋白質分子的DNA連在一起。

7、權利要求6的融合載體，它含有質粒pCG150。

8、一種用于生產純化的蛋白質分子的DNA表達載體，它在表達時產生與蛋白質分子相融合的結合蛋白，包括：

（a）一個編碼結合蛋白或其部分的DNA片段，該結合蛋白對于一種底物具有專一親和性;

（b）一個編碼待純化的蛋白質分子的DNA片段。

9、權利要求1至5中任何一項的方法或權利要求6至8中任何一項的載體，其中的結合蛋白是糖結合蛋白、受體蛋白、氨基酸結合蛋白、硫酸鹽結合蛋白、維生素結合蛋白、金屬結合蛋白、磷酸鹽結合蛋白、外源凝集素結合蛋白或核酸結合蛋白中的任意一種。

10、權利要求9的方法或載體，其中的糖結合蛋白是麥芽糖結合蛋白。

11、權利要求8的載體，其中編碼連接順序的DNA片段插在編碼結合蛋白的DNA和編碼蛋白質分子的DNA之間。

12、權利要求6或11任一個的載體，其中的連接順序包括一個或多個限制位點。

13、權利要求6或11任一個的載體，其中的連接順序編碼的多肽由一種蛋白水解劑識別和切割。

14、權利要求6或11任一個的載體，其中的連接順序編碼一種間隔多肽，它將結合蛋白與由表達載體表達的蛋白質分子分離開來。

15、一種生物反應器，包括：

（a）一種雜交多肽，包括一種可與一種物質相互作用產生所需結果的蛋白質分子，和一種對一種底物具有專一親和性的結合蛋白或其部分;

（b）底物，其中雜交多肽中的結合蛋白成分與此底物結合。

16、一種制備生物反應器的方法，包括：

（a）構建一種在轉化的宿主細胞中表達雜交多肽的DNA表達載體，該雜交多肽包括一種與一種物質相互作用而產生所需結果的蛋白質分子和一種對一種底物具有專一親和性的結合蛋白或其部分;

（b）將表達載體導入合適的宿主細胞中并表達雜交多肽;

（c）使轉化細胞產生的雜交多肽和結合蛋白與之結合的底物接觸。

17、一種使一種物質和一種與之相互作用的蛋白質分子反應而產生所需結果的方法，包括：

（a）使含有蛋白質分子和一種對底物具有專一親和性的結合蛋白或其部分的雜交多肽結合在底物上;

（b）使該物質與結合的雜交多肽接觸。

18、權利要求1、15、16和17中任何一項的方法，其中的底物包含在親和層析柱中。