[其他]一種除去百日咳內(nèi)毒素的方法，一種百日咳類(lèi)毒素及生產(chǎn)方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 88103075
• 申請(qǐng)日: 1988-05-23
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN88103075A
• 公開(kāi)（公告）日: 1988-12-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 藤田勛;渡邊秀夫;宮本正敏
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 武田藥品工業(yè)株式會(huì)社
• 主分類(lèi)號(hào): C07K15/04
• 分類(lèi)號(hào): C07K15/04;A61K39/10
• 代理公司: 中國(guó)國(guó)際貿(mào)易促進(jìn)委員會(huì)專(zhuān)利代理部
• 代理人: 李瑛

1、一種通過(guò)區(qū)域離心由含有Ⅰ期百日咳博德特氏菌菌株之抗感染部分及內(nèi)毒素的液體中除去內(nèi)毒素的方法，特征在于在過(guò)量磷酸根離子存在下向所說(shuō)液體內(nèi)供入鈣離子，然后進(jìn)行區(qū)域離心并棄去所得沉淀物。

2、根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中磷酸根離子對(duì)鈣離子的比例為1.25至30當(dāng)量磷酸根離子比1當(dāng)量鈣離子。

3、根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中比例約為1.5至7.5當(dāng)量磷酸根離子比1當(dāng)量鈣離子。

4、根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所提供的鈣離子是醋酸鈣或氯化鈣的鈣離子。

5、根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所得沉淀物為大約0.01至0.1毫當(dāng)量/ml的磷酸鈣凝膠。

6、根據(jù)權(quán)利要求5的方法，其中所得沉淀物為大約0.02至0.07毫當(dāng)量/ml的磷酸鈣凝膠。

7、根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所得沉淀物是在約4℃至室溫的溫度下、約6.5至9的pH值條件下在20分鐘至2小時(shí)的時(shí)間內(nèi)逐漸形成的。

8、根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所得沉淀物是經(jīng)溶解沉淀物而產(chǎn)生的磷酸鈣凝膠，所說(shuō)的凝膠在1M氯化鈉-0.05M磷酸鹽緩沖液中溶解用硫酸銨分級(jí)沉淀I期百日咳博德特氏菌菌株之培養(yǎng)物的上清液所得到的沉淀物、以大約0.1至1.0W/V%的終濃度向pH約6.5至9的溶液內(nèi)加入醋酸鈣并使混合物于大約4℃至室溫下逐步反應(yīng)大約20分鐘至2小時(shí)而制得的。

9、根據(jù)權(quán)利要求8的方法，其中所加醋酸鈣的終濃度為大約0.2至0.6W/V%。

10、根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中區(qū)域離心是蔗糖梯度離心。

11、根據(jù)權(quán)利要求10的方法，其中蔗糖梯度離心是在下列條件下進(jìn)行的，密度梯度：0至30W/W%;Rmax：約60，000至122，000G;時(shí)間：約10至24小時(shí)。

12、一種生產(chǎn)百日咳類(lèi)毒素的方法，特征在于解毒處理依照權(quán)利要求1的方法制得的含抗感染部分的液體。

13、根據(jù)權(quán)利要求12的方法，其包括

a）將用硫酸銨分級(jí)沉淀I期百日咳博德特氏菌菌株之培養(yǎng)物的上清液所得到的沉淀物溶解在1M氯化鈉-0.05M磷酸鹽緩沖液中，

b）向pH約為6.5至9的溶液內(nèi)加入終濃度為大約0.2至0.6W/V%的醋酸鈣，

c）使混合物于大約4℃至室溫下逐步反應(yīng)約20分鐘至2小時(shí)，

d）棄去所產(chǎn)生的磷酸鈣凝膠，在基本上沒(méi)有堿性氨基酸的情況下向經(jīng)蔗糖密度離心后制得的含抗感染部分的液體內(nèi)加入約0.1至0.6V/V%的甲醛，所說(shuō)蔗糖密度離心的條件是，蔗糖梯度：0至30W/W%;Rmax：約60，000至122，000??G;時(shí)間：約10至24小時(shí)，

e）在大約32至42℃下將混合物保溫約3至14天，以產(chǎn)生絮凝作用，

f）破壞絮凝的類(lèi)毒素，并

g）將類(lèi)毒素懸浮于培養(yǎng)液中。

14、一種百日咳類(lèi)毒素，其內(nèi)毒素含量為每10μg蛋白氮不超過(guò)0.5ng。

15、根據(jù)權(quán)利要求14的類(lèi)毒素，其中內(nèi)毒素含量為每10μg蛋白氮不超過(guò)0.1ng。

16、根據(jù)權(quán)利要求14的類(lèi)毒素，其為按照權(quán)利要求13的方法生產(chǎn)的。